免临床体外诊断试剂临床评价报告-尿碘测定试剂盒

来源：米乐官方入口    发布时间：2024-04-29 11:45:13

  评价****有限公司生产的尿碘测定试剂盒（****显色法）用于尿碘检测时，在100μg/L~500μg/L范围内（孕妇），其检验测试能力与已上市的同种类型的产品无 差异。****医院、****保健院共检测106例受试者样本，按方案剔除标准共剔除样本0例，其中0例为线例为离群值标本，剔除率为0.00%，最终纳入分析106例，其中男性0例，女性106例，平均岁数31.81±4.93岁。本次临床试验结果的Pearson相关系数接近1，说明两种试剂的相关关系越密切。回归方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）接近1，说明两种试剂的一致性比较好。根据说明书里面对准确度允许偏差的标准，医学决定水平处偏倚均在允许偏差范围内。考核试剂与参比试剂检测浓度的差值Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度差值为1.0726±5.4037（均值±标准差），两种试剂检测浓度差值的均值±1.96SD范围在-9.5183到11.6636之间。超出置信区间的百分比为：4.72%。考核试剂与参比试剂检测浓度比值的Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度比值为1.0050±0.0279（均值±标准差），两种试剂检测浓度比值的均值±1.96SD范围在0.9503到1.0597之间。超出置信区间的百分比为：2.83%。经计算，考核试剂定性检测结果参考范围外标本符合率为98.00%（89.50%,99.65%)，参考范围内标本符合率为100.00%（93.58%,100.00%)，总符合率为99.06%（94.85%，99.83%)。进行Kappa一致性分析，Kappa值k=0.9811。对含干扰物质样本的检测，考核试剂和参比试剂检测结果无差异，表明考核试剂和参比试剂的抗干扰性能有较好的一致性。两中心在本次临床试验共检测106例有效样本，通过对考核试剂和参比试剂检测浓度的Pearson相关系数、回归方程、Bland-Altman图做多元化的分析，显示两种试剂检测尿碘浓度有良好的一致性。符合率及Kappa一致性分析显示考核试剂与参比试剂对结果的判断有良好的一致性。后文提到的相关统计，已整理成Excel计算模板，简单好用，相关使用见下面视频教程，你会复制、粘贴即可。

  碘作为人体合成甲状腺激素所必须的微量元素，对维持机体正常生理活动有着及其重要的作用。一般的情况下，机体每日最少需要65μg碘。甲状腺是人体碘含量及浓度最高的组织，碘进入人体后经由碘钠同向转运体(sodium iodine symporter，NIS)由浓度较低的血液转运到浓度较高的甲状腺中。甲状腺中的碘经甲状腺过氧化酶(thyroid peroxidase，TPO)及H202的作用被氧化，并与甲状腺球蛋白(thyroglobulin，Tg)相结合，产生合成甲状腺激素(thyroid hormone，TH)的前体一碘酪氨酸MIT(mono-iodotyrosines，MIT)和二碘酪氨酸DIT(di-iodotyrosines，DIT)。2-个DIT相连生成甲状腺素T4，1个MIT和1个DIT连接生成甲状腺素T3。机体对碘与甲状腺生理活动具有2条调节途径，即下丘脑-垂体-甲状腺轴的反馈调节及甲状腺自身调节系统。前者属于甲状腺外的神经内分泌调节，主要由甲状腺激素水平升降所导致垂体前叶分泌促甲状腺激素(thyrotropic stimulating hormone，TSH)水方向变化的一种负反馈调节；后者属于甲状腺内的自身调节。当机体碘摄入量波动时，机体首先启动第一线保护机制，即甲状腺自身调节首先发挥作用，只有在甲状腺自身调节效果不能够达到调节目的时，特别是为维持甲状腺有机碘池、保障甲状腺最基本正常生理活动时，第二线保护机制：下丘脑-垂体-甲状腺轴才开始启动。碘缺乏可以引起如克汀病、地方性甲状腺肿等疾病，极度影响智力水平及健康质量。自我国1996年实行全民食盐碘化(USI)以来，碘缺乏病(IDD)防治水平已经十分接近碘缺乏病(IDD)消除标准的要求[1]。但是由碘过量所引发的健康问题日渐明显，特别是甲状腺疾病的高发逐渐得到普遍关注，在国外研究中早有报道补碘后甲状腺疾病的变迁，近年来国内慢慢的变多的研究证实不仅低摄碘会对健康产生威胁，摄碘过量一样能影响甲状腺功能及形态，导致多种甲状腺疾病。过高或过低的碘摄入均可以引起甲状腺肿，而碘摄入过多或低碘地区不科学的补碘可以引起碘中毒和碘过敏因此导致高碘甲亢与自身免疫性甲状腺疾病，而甲状腺癌的高发同样与摄碘异常相关 。尤其是在食盐碘化(USI)后，全球甲状腺疾病发病率成上涨的趋势，即使通过手术治疗，内分泌治疗，放射碘治疗等多种方法治疗，甲状腺疾病并非可以完全治愈，其仍存在较高复发率，除外甲状腺自身内部因素作用，外界环境中碘对甲状腺不无影响。

  尿碘(urinary iodine，UI)，是指尿液中含碘量。一方面能指是单位容积内尿液中含碘量，即尿碘质量浓度；另一方面也可用来说明一定容量的尿液中含碘量，即尿总含碘量。而研究中的尿碘(UI)一般是指尿碘质量浓度。依据尿液采集的时间、方法不一样，可分为晨起尿碘、日间随意一次尿碘，临床等研究通常选取晨起尿碘作为监测对象。碘可经由皮肤、呼吸道、消化道被人们的身体吸收，但与由消化道吸收碘量相比由皮肤、呼吸道吸收碘量微乎其微，所以相关研究均选取膳食摄碘作为研究对象。碘在体内主要被甲状腺利用，未被利用的碘均排出体外，其中约85％随尿液排出，10％随粪便排出，其他经汗液、乳汁等排出，且因由膳食调查方法来计算碘摄入量很难，尿碘检测便捷准确，所以人体碘营养状况可以用尿碘水平来衡量。通过选取少数的样本对其尿碘进行统计，所得结果就可以反映出这一人群的碘营养水平。

  ****有限公司生产的尿碘测定试剂盒采用氧化显色法检测，人体尿液经尿液纯化装置除去干扰物质，在酸性环境下，尿液中的碘可以催化过氧乙酸氧化四甲基联苯胺（TMB），显蓝色。在一定浓度范围内，碘的浓度与成色强度成正比。在 635nm 条件下可读取吸光度判读结果。

  为验证****有限公司生产的尿碘测定试剂盒（****显色法）有没有临床应用价值，根据《免于临床试验的体外诊断试剂临床评价技术指导原则的通告（2021年第74号）》开展临床评价，以验证产品的临床效果。

  根据《免于临床试验的体外诊断试剂临床评价技术指导原则的通告（2021年第74号）》，并考核医院该项目的临床开展情况，申办方（****有限公司）选择**院、****保健院开展临床评价试验。

  3. 对于定量试剂，对比试剂与待评价试剂的检测结果应具有相同的计量单位或二者之间的计量单位可相互转化。

  4. 优先选择与待评价试剂检测结果偏差较小的试剂，不建议选择性能劣于待评价试剂的作为对比试剂。

  1.预期用途（1）适用人群（2）样本类型（3）被测物（4）适用的疾病/状态（5）使用环境

  与安徽惠邦生物工程有限公司生产的尿液碘定量分析仪配套使用，用于体外对人尿液中碘含量的定量检测。

  用于体外定量检测人体样本（尿液）中碘的含量，临床上大多数都用在甲状腺疾病的辅助诊断。

  孕妇：正常范围（150-500）μg/L。碘缺乏：150μg/L,碘超量：500μg/L。

  孕妇：正常参考值150μg/L～500μg/L。通过测定120例孕妇的尿液标本，经统计学处理（正态分布，95%置信区间）确定参考区间。

  1、样品处理：取1mL稀释液加入尿液纯化装置中，再加入尿液1mL摇匀，过滤、收集滤液、备用。2、样品测量：在搜集的纯化尿液中，加入150μL（5滴）显色剂，混匀，再加入30μL（1滴）氧化剂，立即按“测量”键，混匀之后，放入尿液碘定量分析仪检测池中，准确反应60秒时，读取样本的浓度值，即为尿液中碘的含量。

  仪器法检验步骤：按照****有限公司生产的尿碘检测系列仪器的说明书进行具体操作，直接读取尿碘浓度。手工法检验步骤：1.样本处理在尿液纯化装置中加入2ml稀释液，取0.5ml尿液加入尿液纯化装置，摇匀后过滤，收集滤液，备用。2.样本检测1） 定标：在比色杯中分别加入200μl碘标准溶液（300μg/L）和800μl样本稀释液，混匀后放入设置检测波长为635nm的分光光度计，调零。加入90μl显色液，混匀，再加入30μl复合氧化剂，开始计时并混匀，准确反应60s，读取300μg/L碘标准溶液的吸光度值Y1。将碘标准溶液（300μg/L）用纯化水稀释至150μg/L重复上述步骤，得出吸光度值Y2，过（150,Y2）（300,Y1）两点拟合获得标准曲线ml滤液，放入设置检测波长为635nm的分光光度计，调零；加入90μl显色液，混匀，再加入30μl复合氧化剂，开始计时并混匀，准确反应60s，读取吸光度值。根据标准曲线计算尿碘浓度。

  1.最低检出限：不高于20μg/L；2.线.批内精密度：变异系数CV≤10%。4.批间精密度：变异系数CV≤15%。5.准确度：相对偏差≤15%。6.干扰物质：该检测试剂对加入终浓度为25mg/dL的蛋白质，50mg/dL的葡萄糖，0.5mg/dL的胆红素、5mg/dL的尿酮体、0.03mg/dL的亚硝酸盐的0μg/L碘的阴性质控液，检测结果不大于10μg/L。

  1.准确度：两个样本回收率与平均回收率的差值小于±10%，比例系统误差小于5%。2.试剂空白：试剂空白吸光度≤0.01。3.线μg/L，回归系数r应≥0.990。4.批内精密度：变异系数CV≤15%。5.批间精密度：变异系数CV≤15%。6.干扰物质：检测标本中维生素C：浓度≤20 mmol/L，氯化钠：浓度≤0.1 mol/L，溴化钠：浓度≤0.1 mol/L，胆红素：浓度≤100μmol/L，血红蛋白：浓度≤100mg/dl，乳糜（以甘油三酯计）：浓度≤200mg/dl，对检测结果不存在很明显干扰。

  试剂盒未配备质控品，可选择冻干人尿碘成分分析标准物质GBW(E)090016（121±14）μg/L；冻干人尿碘成分分析标准物质GBW(E)090017（201±11）μg/L对试剂盒进行质量控制。

  试验操作人员应为拥有相对应试验能力的专业方面技术人员，并熟悉待评价试剂和对比试剂的检测流程。

  试验应考虑到临床实际使用情况和日间重复性影响，在保证符合样本稳定性的条件下，设定合理的维持的时间，如3～20天，应采用待评价试剂和对比试剂分别对所有样本做编盲、随机检测，整个试验应有内部质量控制。

  试验过程由申请人来管理并负责试验数据的真实性、合规性及完整性。境外申请人如需进行中国境内开展的方法学比对研究，应通过其在中国的代理人在中国境内开展试验。

  申请人也可以提交在境外完成的试验资料，资料内容应满足本指导原则的技术方面的要求，并应最大限度地考虑流行病学差异、受试人群的差异，使用的环境与条件差异等对研究结果产生的可能影响。必要时，申请人应针对差异因素在我国境内做补充研究。

  采用方法学比对方式来进行评价，对比试剂为安徽惠邦生物工程有限公司生产的尿碘测定试剂盒（****显色法）。

  1.4.1.6配套使用的其他试剂/仪器的产品的名字、生产企业、规格/型号和批号等。

  ⑵与已上市产品做比较研究：通过选择目前临床一致认为质量较好的产品作为比对试剂对****有限公司生产的尿碘测定试剂盒（****显色法）进行评价，以判断其诊断检验测试能力与已上市的检测试剂盒无差异。

  按《免于临床试验的体外诊断试剂临床评价技术指导原则的通告（2021年第74号）》，定量产品可选择总样本量不少于100例并分别采取了待评价试剂和对比试剂/参考办法来进行单次测定的方式。

  本临床研究为方法学比对设计，采用相关系数检验(连续变量)计算样本量，根据美国国家临床实验室标准化委员会制定的CLSI EP9-A2标准，考核试剂与参比试剂的检测结果的相关系数不能低于0.975，预计本试验的相关系数在0.985以上，故设定参数： α=0.05，s=1(单侧)，β=0.2，ρ0=0.975，ρ1=0.985，依据相关系数检验(连续变量)样本量估算公式] ,计算样本量，具体如下：

  结合本产品的预期用途，本次选择需要评估尿碘浓度的临床样本，或其他类似的疾病患者和正常健康人群的样本。

  另外，在临床试验中选择部分含干扰物质的样本做对比研究，以从临床角度验证试剂的特异性。

  ⑶受试者在留取尿样的前一天不得食用海带、紫菜等高碘食品和含碘药品，也不得为了故意排尿而饮水。

  ⑶受试者在留取尿样的前一天不得食用海带、紫菜等高碘食品和含碘药品，也不得为了故意排尿而饮水。

  ⑷尿样2℃-8℃下可保存24小时，不建议冷冻保存。经纯化的尿液必须在30min内完成显色操作。

  有效期：12个月。试剂开封后应尽快检测，暂不能检测时，可在2℃-8℃，无服饰性物质的避光环境中密封保存，可放置72小时。

  适用仪器：适用于安徽惠邦生物工程有限公司生产的HB-DI型尿液碘定量分析仪。

  对比试剂确立依据：安徽惠邦生物工程有限公司生产的尿碘测定试剂盒（****显色法）与考核试剂方法学、检测物质、临床预期用途、主要性能指标、推荐的阳性判断值或参考区间等方面基本一致，且参比试剂的临床应用广泛，产品质量好。因此，选择该公司生产的试剂作为参比试剂。

  如果出现一个以上的离群点，但它们并未超出医学上有临床意义的界限，则可保留并使用这一些数据。如果离群点超出医学上有临床意义的界限，应删除该点，但每组数据中被删除的离群值不能超过2.5%。如果超过2.5%，则应调查是不是真的存在干扰、人为错误或仪器故障。如果有几个分析物同时在同一仪器设施上评价，检查出现非常明显偏差的样本的其它分析物的结果，同时也应检查同一分析批的质量控制结果。

  如出现离群值，除对离群值产生原因做多元化的分析外，同时进行两次统计分析（包括/不包括离群值），如两次统计分析的结果不一致，应做到合理分析。

  以考核试剂检测结果为Y轴，参比试剂检测结果为X轴作散点图。采用最小二乘法进行线性回归分析，计算斜率（b）和截距（a），建立回归方程Y=a+bX。

  同公式（8）、（9）。⑶Bland-Altman图以同一样本考核试剂与参比试剂检测浓度的均值为X，检测浓度的差值（考核试剂-参比试剂）和差值百分比（（考核试剂-参比试剂）/考核试剂与参比试剂均值）为Y轴作散点图，并标注两种试剂检测浓度的差值或差值百分比的均值、一致性界限（Mean±1.96SD）。

  根据考核实际与参比试剂检测结果计算医学决定水平处偏倚，最小二乘法医学决定水平处偏倚公式如下：

  (1)研究者根据受试者的原始观察记录，将数据及时、完整、正确、清晰地载入数据采集表；

  (2)监查员监查试验的进行是否遵循试验方案。确认所有数据采集表填写正确完整，并与原始资料一致。如有错误和遗漏，及时要求研究者改正。修改时需保持原有记录清晰可见，改正处需经研究者签名并注明日期；

  (3)经过监查员检查数据采集表无误后，及时送交临床试验数据管理员。对于完成的数据采集表在研究者、监查员、数据管理员之间的传送应有专门的记录，收到时应有相应的签名，记录需妥善保存。

  应采用与预期用途声称样本类型一致的人体样本做试验，样本背景信息应清晰，样本来源应可溯源。样本背景信息包括但不限于：样本来源、唯一且可追溯的编号、样本类型和其他相关背景信息（如年龄、性别、干扰因素等）；对于试剂检测结果有明确疾病指向的产品，其纳入的样本所来源的病例应有明确的临床诊断信息。

  样本采集方式及稳定性应符合待评价试剂和对比试剂说明书有关要求。原则上，应采用临床真实样本做研究。当遇真实样本浓度无法覆盖检验测试范围时，应充分阐述没有办法获得的依据，酌情采用稀释或者经处理去除分析物获得低浓度样本、添加分析物获得高浓度样本等人工制备样本，人工制备样本应最大限度地考虑样本的背景信息，基质效应等影响因素，一般而言，人工制备样本不应超过总样本量的20%。

  临床试验开始时，临床试验单位应做好充足的准备，掌握试验产品的使用方法和有关技术，确保有充足的人力和时间来保障试验的进行。申办者对试验产品的使用及有关技术对临床试验人员进行充分的培训，并提供足够的试验试剂。在没做好充分的准备前，不开展临床试验。

  本试验产品为体外诊断试剂，不会对受试者造成直接的伤害。在进行临床验证时，不会产生不良反应。测试采集全血样本属于医疗常规项目，风险极小。

  本产品在试验中若出现和预期严重不相符的情况，应立即暂停试验，找到原因，再重新开始或停止临床试验。

  ****保健院、****医院最终纳入分析106例，均为女性，平均岁数31.81±4.93岁。详情下表。>

  根据回归分析和相关分析计算公式，计算****保健院、****医院数据Pearson相关系数r=0.9993，大于0.975，样本分布合适。对数据来进行最小二乘法回归分析，计算得截距（a）及其95%CI：-0.0129(-1.9248,1.8991)，斜率（b）及其95%CI：1.0049(0.9977,1.0121)，回归方程为：Y=-0.0129+1.0049X，决定系数r2=0.9993。斜率的置信区间包括1，且截距的置信区间包括1，说明两方法在统计学意义上没有差异，即两方法等效。

  以考核试剂与参比试剂检测浓度的差值为Y轴，均值为X轴绘制Bland-Altman散点图，考核试剂与参比试剂检测浓度的差值Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度差值为1.0726±5.4037（均值±标准差），两种试剂检测浓度差值的均值±1.96SD范围在-9.5183到11.6636之间。超出置信区间的百分比为：4.72%。两种试剂检测浓度差值的变化呈检测浓度均值越大差值越大的趋势。

  以考核试剂与参比试剂检测浓度比值为Y轴，均值为X轴绘制Bland-Altman散点图，考核试剂与参比试剂检测浓度比值的Bland-Altman散点图显示：考核试剂与参比试剂检测浓度的比值Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度比值为1.0050±0.0279（均值±标准差），两种试剂检测浓度比值的均值±1.96SD范围在0.9503到1.0597之间。超出置信区间的百分比为：2.83%。两种试剂检测浓度差值百分比基本在±SD之间均匀分布。

  医学决定水平指在诊断及治疗工作时，对疾病诊断或治疗起关键作用的某一被测物浓度，临床上一定要采取措施的检测水平。根据国家食品安全风险评估专家委员会2010年5月14日发布的《中国食盐加碘和居民碘营养状况的风险评估》，尿碘缺乏的参考标准为100μg/L，偏高的参考标准为300μg/L。以及根据贵州省疾控中心杨宇，周德梅，张念恒.尿碘测定方法不确定度的评价[J].微量元素与健康研究.2016.05,33(3),尿碘测定方法的扩展不确定度为5.9μg/L。即可接受的偏倚限值为（-5.9μg/L，5.9μg/L）。①按最小二乘法计算医学决定水平处的偏倚：

  最小二乘法及Deming回归医学决定水平处的偏倚均在可接受的偏倚限值内，说明医学决定水平处的偏倚是可接受的。

  本次临床试验结果的Pearson相关系数接近1，说明两种试剂的相关关系越密切。回归方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）接近1，说明两种试剂的一致性比较好。根据说明书里面对准确度允许偏差的标准，医学决定水平处偏倚均在允许偏差范围内。考核试剂与参比试剂检测浓度的差值Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度差值为1.0726±5.4037（均值±标准差），两种试剂检测浓度差值的均值±1.96SD范围在-9.5183到11.6636之间。超出置信区间的百分比为：4.72%。考核试剂与参比试剂检测浓度比值的Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度比值为1.0050±0.0279（均值±标准差），两种试剂检测浓度比值的均值±1.96SD范围在0.9503到1.0597之间。超出置信区间的百分比为：2.83%。经计算，考核试剂定性检测结果参考范围外标本符合率为98.00%（89.50%,99.65%)，参考范围内标本符合率为100.00%（93.58%,100.00%)，总符合率为99.06%（94.85%，99.83%)。进行Kappa一致性分析，Kappa值k=0.9811。对含干扰物质样本的检测，考核试剂和参比试剂检测结果无差异，表明考核试剂和参比试剂的抗干扰性能有较好的一致性。

  两中心在本次临床试验共检测106例有效样本，通过对考核试剂和参比试剂检测浓度的Pearson相关系数、回归方程、Bland-Altman图做多元化的分析，显示两种试剂检测尿碘浓度有良好的一致性。符合率及Kappa一致性分析显示考核试剂与参比试剂对结果的判断有良好的一致性。